La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es un método esencial en el diagnóstico molecular y las ciencias de la vida. La PCR requiere ciclos térmicos para calentar el ADN para la separación de cadenas y enfriarlo para la replicación. El proceso utiliza un hardware especializado y expone las biomoléculas a temperaturas superiores a los 95 °C. Aquí, diseñamos una helicasa PcrA M6 con velocidad y procesividad mejoradas para reemplazar el paso de calentamiento por el desenrollado enzimático del ADN mientras se conservan las características de PCR deseadas. Llamamos a este método de amplificación isotérmica SHARP (SSB-Helicase Assisted Rapid PCR) porque utiliza la helicasa diseñada y la proteína de unión al ADN monocatenario (SSB) además de los reactivos de PCR estándar. SHARP puede generar amplicones con longitudes de hasta 6000 pares de bases. SHARP puede producir ADN funcional, un plásmido que confiere a las células resistencia a los antibióticos, y puede amplificar fragmentos específicos del ADN genómico de células humanas. Además, usamos SHARP para evaluar el resultado de la edición CRISPR-Cas9 en sitios genómicos endógenos.
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Tamaño: 2,07
Publicado: 10 de noviembre de 2022
Fuente: Nature
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